紫外交聯儀在測定麥角硫因抑制紫外輻射誘發自由基性能方面的應用
麥角硫因（ergothioneine，EGT）作為***種天然手性氨基酸衍生物，存在硫醇和硫酮兩種互變異構形式。研究表明EGT可抑制脂質過氧化損傷，清除羥自由基（·OH）、超氧化物和單線態氧（1O2）等多種活性氧（ROS）物質，是優異的皮膚光敏保護劑。通過紫外線照射光敏劑羅丹明B（RhB）溶液誘發包括1O2在內的自由基體系（簡稱UV-RhB體系），模擬紫外線照射人體皮膚產生ROS的情況，研究EGT在此體系下的抗氧化性能及其穩定性，以期為EGT應用于抗衰護膚品的開發提供理論依據。
實驗方法 1. UV-RhB體系中EGT和VC抗氧化性能的測定 以pH 7.2的磷酸鹽緩沖液（PBS，取2.2 g Na2HPO4，0.3 g NaH2PO4和8.5 g NaCl，加水溶解至1000 ml）為溶劑，分別配制0.001 %羅丹明B溶液（RhB）、0~1.00 mg/ml的EGT溶液及維生素C（VC）溶液。按表1配制測定溶液體系I、II，置紫外光（波長254 nm，光強度5 mW/cm2）下照射。分別于0，1 h時，采用酶標儀，測定555 nm波長處吸收值（A0和A1），每個樣品平行3份，計算0 h和1 h吸光度變化量的平均值（ΔA），以ΔA空白為基線，按下式計算體系中活性物質的抗氧化性能（F）。F（%）= （ΔA空白-ΔA樣品）/ ΔA空白×100 ΔA空白式中，ΔA空白：空白對照溶液的吸收值的變化量（A0空白-A1空白）；ΔA樣品：樣品溶液的吸收值的變化量（A0樣品-A1樣品）。 2.離子強度對EGT抗氧化性能的影響 按表1配制測定溶液體系III，EGT溶液濃度為0.25 mg/ml，以EGT濃度為0的體系作為空白對照，分別加入NaCl濃度分別為0 %，0.40 %，0.85 %，1.30 %，1.75 %的PBS。按2.1項下方法平行測定3份，取其平均值，計算不同離子強度體系的ΔA和F值。 按表1配制測定溶液體系IV，EGT溶液濃度為0.25 mg/ml，以EGT濃度為0的體系作為空白對照，用0.1 mol/L HCl溶液和0.1 mol/L NaOH溶液分別調節PBS緩沖液pH值為3.0，5.0，7.2，9.0，11.0。按1項下方法平行測定3份，取其平均值，計算不同pH體系的ΔA和F值。 4.還原劑對EGT抗氧化性能的影響 按表1配制測定溶液體系V，EGT溶液濃度為0.25 mg/ml，并以EGT濃度為0的體系作為空白對照，Na2SO3溶液以PBS緩沖液為溶劑，濃度分別為0 %，0.02 %，0.05 %，0.10 %，0.25 %，0.50 %。按1項下方法平行測定3份，取其平均值，計算不同還原劑濃度體系的ΔA和F值。 5.金屬離子對EGT抗氧化性能的影響 按表1配制測定溶液體系VI，其中溶劑為生理鹽水，EGT溶液濃度為0.25 mg/ml，并以EGT濃度為0的體系作為空白對照。分別加入0.05 mol/L的K+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Fe3+生理鹽水溶液。按1項下方法平行測定3份，取其平均值，計算不同金屬離子體系的ΔA和F值。 6.EDTA對EGT抗氧化性能的影響 按表1配制測定溶液體系VII，其中溶劑為生理鹽水，EGT溶液濃度為0.25 mg/ml，并以EGT濃度為0的體系作為空白對照。分別加入0.10 mol/L的Fe3+溶液和0 %，0.02 %，0.04 %，0.10 %，0.20 %的EDTA溶液。按1項下方法平行測定3份，取其平均值，計算不同EDTA濃度體系的ΔA和F值。
實驗結果 不同濃度EGT和VC的抗氧化性能見圖1。由圖1可見，0~1 mg/ml范圍內，EGT和VC的F值隨濃度的升高而增大，且相同濃度下EGT的F值***直高于VC，表明EGT和VC抗氧化作用具有較好的量效關系，同時在此體系下EGT的抗氧化性能優于VC。 離子強度對EGT抗氧化性能的影響見圖2。由圖2可見，NaCl濃度在0 %~0.85 %范圍內，EGT的F值較為穩定，當NaCl濃度高于0.85 %時，F值急劇下降，表明此時EGT抗氧化性能受到體系內高離子強度的抑制而顯著降低。 pH值對EGT抗氧化性能的影響見圖3。由圖3可見，在pH 5~9范圍內EGT的F值變化相對較小，表明EGT抗氧化活性在pH 5~9范圍內較為穩定。 還原劑亞硫酸鈉對EGT抗氧化性能的影響見圖4。由圖4可見，隨著亞硫酸鈉濃度的增大，F值呈下降趨勢，表明在此體系中加入亞硫酸鈉可抑制EGT的抗氧化活性。亞硫酸鈉濃度大于0.1 %時，F值趨于穩定，表明其抑制作用趨于平緩。
